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AID的操作规程

文章来源:本站原创 更新时间:2013-10-12

   1、确定适应症,排除禁忌症。通过认真详细询问病史及查体,进行必要的化           

验检查,依照上述标准男科及女科医生共同讨论确定。

    2、签署知情同意书:按照AID知情同意书的内容充分向患者夫妇交代知情,使其充分了解其权利及义务,在充分知情同意的前提下,签署《供精人工授精知情同意书》、《多胎妊娠减胎知情同意书》、《供精人工授精随访知情同意书》、《供精助孕治疗夫妇后代婚育排查知情同意书》,并填写患者需求表。对于上述适应症1.2.3.中除不可逆的无精子症外,另外签署《申请供精人工授精助孕知情同意书》。

    3、查验有效证件。按照卫生部要求患者夫妇要提供双方身份证、结婚证、无子女证明(县、乡、街道计划生育部门审核盖章)或多胎指标,(其中无子女证明要原件,多胎指标在医护人员核对原件后复印,无子女证明及多胎指标一年有效)及户口簿的复印件。

   4、由经治医生认真书写AID病志,将知情同意书、有效证件及必要的化验单等病历资料装订成册,永久保存。

   5、预约精源:按照患者的需求,结合精子库所提供的精源体貌卡选定精源,尽量要选择与不孕夫妇男方血型一致的精源。

   6、确定排卵

(1)宫颈黏液检查:宫颈黏液随着雌孕激素的周期变化而呈现周期的变化,

近排卵期时宫口张开,黏液拉丝度可达10cm以上。此时,黏液最清,最有利

于精子通过,这些现象均提示即将排卵。排卵后宫颈黏液分泌量减少,拉丝

度仅为1~2cm。宫颈黏液排卵期呈典型的羊齿植物状结晶,排卵后或妊娠期呈

椭圆体。

(2)性激素测定: LH、E2、P

I LH测定:排卵发生在血LH峰起点后34~35小时或尿LH后12~24小时。临床上

常测定尿LH峰来预测即将排卵,方法简单,价廉,患者可在家自行监测。

II、 E2测定:在正常月经周期中,E2值呈周期性变化,目前临床上常用简便

且无创伤的方法可间接了解E2水平,如宫颈黏液情况,再结合尿LH的连续监

测并配合B超等,可确定有无排卵及排卵时间。

III、P测定:排卵前夕成熟卵泡可产生少量P。在正常月经周期中的卵泡期

血中P值不超过3.2nmol/L,晚卵泡期若发现血中P值出现上升,则表示即将

排卵。若P值>9.6nmol/L,则可诊断已排卵。

(3)B超监测卵泡发育

于月经周期的第11天或促排卵治疗周期的第3~5天开始监测卵泡发育,

根据卵泡大小隔日或隔数日再监测,当卵泡直径≥18×18mm,且尿LH

化验阳性,当日行人工授精,并可于排卵后再授精一次;如果卵泡直

径≥18×18mm,尿LH阴性或弱阳性时,注射HCG5000-10000IU, 24小

时后行人工授精。

7、药物促排卵方法:对于有排卵障碍的患者,采取以下方法促排治疗。

(1)克罗米酚(CC):月经第3~5天开始每日口服克罗米酚50mg~100mg,连服五天;

(2)尿促性素(HMG)75IU或150IU,每日肌肉注射;

(3)、CC结合HMG:月经第3~5天 CC50-100mg,每日一次口服,月经第5~7天 HMG 75~150IU,每日一次肌注;

(4)、果那芬(GONAL-F)75或150IU,每日一次肌注。

当B超监测至少有一个卵泡直径≥18×18mm时,给予HCG5000-10000IU肌注

,注射后的36-48小时行人工授精。

 

8、实验室操作常规

(1)、器械和物品准备

装满液氮的冷冻储存罐2个、配置阴道探头的B超仪、离心机、恒温水浴锅、生物显

微镜、解剖显微镜、百级超净工作台、CO2培养箱、冰箱、精液分析仪、精子计数

板、1ml一次性无菌注射器、10μl微量加样器、微量吸头、装2ml冻存管管架的塑

料盒子。

(2)精子处理培养液的准备

Ⅰ精子冲洗培养液(ART-1006)

ART-1006开瓶后每10ml分装入14ml一次性塑料试管(352001)中,置4℃-8℃冰箱

中保存。使用前紧盖放入37℃、5%CO2培养箱中平衡4—12小时。

Ⅱ精子孵育培养液(ART-1020)

配制5%人血清白蛋白(HSA,ART-3001)的ART-1020培养液,然后装入352001中

混匀,使用前松盖放入37℃、5%CO2培养箱中平衡4--12小时。

Ⅲ90% Percoll(密度梯度离心)液(Sigma)

取Percoll 液9ml加入15ml一次性刻度离心管中(352097),再加入1ml  10×

Earle’s培养液(Sigma)混匀,即成90%Percoll 液,置4℃-8℃冰箱中保存。

临用时置室温中待用。

(3)、精子标本处理操作步骤

Ⅰ、精子复苏

认真核对患者夫妇姓名,各种记录表内容要仔细填写。复苏时必须经2人核对Donor

密码后,方可进行精子解冻。解冻时先将精子冷冻管盖松开,然后放入37℃水浴锅

十分钟即可。

Ⅱ、精子处理

①、二次混合离心后上游:

复苏后的精子标本吸入装有3ml ART—1006的352097中,混匀后3000 转 / 分,离

心 5分钟,弃去上清液,再重复上述过程1次,然后贴管壁小心加入0.5-1.0 ml

ART—1020,置37℃、5%CO2培养箱中孵育30分钟,最后将上层ART—1020吸入6ml一

次性试管(2003)中,置37℃、5%CO2培养箱中待用。

②、Percoll法:取6ml ART—1006,分别放入2支352097中,每支3ml。将复苏后的

精液标本放入装有3ml ART—1006的352097中,混匀后3000 转 / 分,离心 5分钟,

弃去上清液,加3ml ART—1006混匀后700转/分,离心30秒,吸取上清液贴管壁小心

加入到90% Percoll 液的上面,3000转/分,离心15分钟,吸去上层精液和部分95% Percoll液,将底部沉淀物移入装有3ml ART—1006的352097中3000 转 / 分,离心 5分

钟,弃上清液,加入3ml ART—1020,3000 转 / 分,离心 5分钟,弃上清,贴管

壁小心加入1.0 ml ART—1020,置37℃、CO2培养箱中孵育30分钟,最后将上层ART

—1020吸入2003中,置37℃、5%CO2培养箱中待用。

(4)、精子移植

Ⅰ、阴道内移植(IVI)

用移植管吸取复苏后的精子标本进行IVI。

Ⅱ、宫腔内人工授精(IUI)

用移植管吸取复苏后经过处理的精子标本0.5—0.8ml,一般不超过1.0ml,进行宫

腔移植,再将剩余标本吸入移植管,进行宫颈内移植(ICI)。

 

9.  人工授精临床操作方法:

患者排空膀胱后取膀胱截石位。庆大霉素、生理盐水擦拭外阴及阴道分泌物。

通过宫颈将IUI导管插入宫腔缓慢将洗涤处理后的精液0.5~0.8ml经导管注入

宫腔(IUI)或将复苏后的精子注入宫颈(ICI)或注入阴道内(IVI)。术后

卧床休息1小时。黄体支持治疗:黄体酮20mg,每日一次肌注,连续20天。授

精后20天查血或尿HCG,确定生化妊娠。确定生化妊娠后2周B超检查妊娠情况

(是否是宫内妊娠、妊娠胎数)。将结果记录于病历中。如果发现优势卵泡未

破裂,在LH峰后40小时左右可行卵泡刺破+宫腔内人工授精。

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